Autor: Lcda. en Bioanálisis María G. Pérez
Revisado por: Lcdo. en Bioanálisis Oliver Balza
Transporte y conservación de muestras del tracto respiratorio inferior.
Las muestras respiratorias deben trasladarse al laboratorio en contenedores estériles, perfectamente cerrados y en un plazo máximo de 2 horas desde su recolección. Los esputos, lavados broncoalveolar, aspirados traqueales se recogen en un frasco de boca ancha con cierre hermético, preferiblemente de rosca, sin medio de transporte. De no llevarse al laboratorio en el plazo de tiempo indicado, guardar en nevera máximo 24 horas. Para las muestras obtenidas por catéter telescopado o biopsia pulmonar se utilizarán tubos estériles con 1 ml de suero fisiológico. Los productos de aspiración se depositan en un tubo estéril con tapón de rosca. Las secreciones recogidas por cepillado se transportan, en tubos con tapón de rosca, diluidas en 1 ml de solución salina.
Manejo de la muestra en la recepción, en el laboratorio de microbiología.
Las muestras respiratorias deben trasladarse al laboratorio en contenedores estériles, perfectamente cerrados y en un plazo máximo de 2 horas desde su recolección. Los esputos, lavados broncoalveolar, aspirados traqueales se recogen en un frasco de boca ancha con cierre hermético, preferiblemente de rosca, sin medio de transporte. De no llevarse al laboratorio en el plazo de tiempo indicado, guardar en nevera máximo 24 horas. Para las muestras obtenidas por catéter telescopado o biopsia pulmonar se utilizarán tubos estériles con 1 ml de suero fisiológico. Los productos de aspiración se depositan en un tubo estéril con tapón de rosca. Las secreciones recogidas por cepillado se transportan, en tubos con tapón de rosca, diluidas en 1 ml de solución salina.
Manejo de la muestra en la recepción, en el laboratorio de microbiología.
Se deben comprobar los siguientes requisitos:
a) La correcta identificación de la muestra en los recipientes y medios de transporte, así como en los libros de control del laboratorio.
b) Valoración de la cantidad adecuada de la muestra para el estudio solicitado.
c) Comprobación de que el tiempo, condiciones de transporte y conservación son adecuadas.
d) Cultivos y determinaciones solicitadas.
Cada laboratorio debe elaborar y distribuir los criterios de aceptación y rechazo de las muestras. Las muestras que incumplan los requisitos de calidad establecidos, deben ser rechazadas para su procesamiento y se debe emitir un informe escrito en que se detallen los motivos del rechazo.
Procesamiento de la muestra:
Selección de los medios de cultivo y condiciones de incubación.
Las muestras se deben procesadas según las normas de bioseguridad establecidas ya que los aerosoles pueden producir infecciones respiratorias adquiridas en el laboratorio. Se deberán tener en cuenta las siguientes recomendaciones:
- Procesar todas las muestras lo más rápidamente posible para mantener la viabilidad de los patógenos y evitar al paciente repetir los procedimientos de la toma de la muestra.
- Seleccionar la porción más purulenta o más sanguinolenta de la muestra.
- Preparar extensiones de la muestra sobre varios portaobjetos para las tinciones (Gram, Ziehl Neelsen, etc).
- Utilizar hisopos (parte sin algodón, segun sea el caso), pipeta o asa estériles, para inocular las muestras en los medios de cultivo.
Es necesario hacer hincapié en cuanto a la observación de la coloración de Gram de las muestras a procesar; ya que esta proporcionara datos muy importantes para el estudio e interpretación del cultivo; uno de ellos es la calidad de la muestra, es decir si es representativa o no, el parámetro para evaluarla es por medio de los criterios que se describen a continuacion. La ausencia de leucocitos y la presencia de células de planas podria sugerir que no se ha recogido material del foco infeccioso, y la muestra está contaminada o formada por saliva por lo que su evaluación quedaría a criterio.
A continuación se presentan los criterios de reportes para frotis coloreados con la tinción de Gram.
Reporte de la coloración de Gram.
Cantidad relativa de microorganismos Microorganismos observados por campo de inmersión (100x)
0-1 muy escasos
2-5 escasos
6-10 moderado
mayor a 10 abundante.
Blastoconidias observadas por campo de (40x)
0-5 Muy escaso
6-10 Escasos
11-20 Moderados
mayor a 21 Abundante
Nota: Es importante informar y describir claramente todo lo que se observe, presencia y cantidad relativa de células epiteliales, células polimorfonucleares y estructuras fúngicas (se evalúan con objetivo de 40X). En cuanto a los microorganismos bacterianos y fúngicos señalar su morfología, cantidad y disposición. El intervalo de reporte de los elementos cuantificables, no debe exceder de dos células de diferencia por campo observado.
Nota: Es importante informar y describir claramente todo lo que se observe, presencia y cantidad relativa de células epiteliales, células polimorfonucleares y estructuras fúngicas (se evalúan con objetivo de 40X). En cuanto a los microorganismos bacterianos y fúngicos señalar su morfología, cantidad y disposición. El intervalo de reporte de los elementos cuantificables, no debe exceder de dos células de diferencia por campo observado.
Para la visualización de las micobacterias en las muestras de esputos se utiliza la tinción de Ziehl Neelsen, el hallazgo de bacilos acido resistentes (BAR), en extensiones teñidas y examinadas al microscopio es la primera evidencia de la presencia de micobacterias en una muestra clínica. La característica de acido- resistencia se la debe al alto contenido lípidico de la pared micobacteriana; es el procedimiento más fácil y rápido que se puede efectuar y aporta al clínico una confirmación valiosa que, en condiciones de la salud del paciente y control epidemiologico, sirve para iniciar el tratamiento y confirmar el caso. El microorganismo acido- resistente implicado con frecuencia en infecciones del tracto respiratorio inferior es el Mycobacterium tuberculosis.
A continuación se describirá como se debe reportar el resultado de la coloración de Ziehl Neelsen:
Resultado - Microorganismo observado (100x)
Negativo (-) No se observa BAR en 100 campos microscópicos observados.
Positivo (+) < align="justify">Positivo (++) Uno a 10 BAR en 50 campos microscópicos observados
Positivo (+++) Más de 10 BAR en 20 campos microscópicos observados
El reporte se realiza en forma de cruces, según los criterios expresados en la tabla anterior. En caso de encontrarse de 1- 4 BAR en 100 campos microscópicos observados en objetivo de inmersión debe ampliarse la lectura a otros 100 campos utilizando una nueva línea de observación, en la misma preparación, e informar el resultado.
Cultivo:
Los medios a utilizar para cultivos bacterianos son medios enriquecidos, selectivos y diferenciales, dependiendo de la sospecha etiológica. Su elección puede variar dependiendo de la experiencia y preferencias de cada laboratorio. Excepto en algunas investigaciones muy específicas como en el caso de la tuberculosis, el medio solido que comúnmente se utiliza es el Lowenstein Jensen y medios para el aislamiento de Legionella como es el Agar de Carbón Tamponado y Extracto de Levadura (BCYE); y en el caso de Nocardia se utiliza el Martin Lewis entre otros.
Para concluir, es importante resaltar que para el procesamiento de muestras provenientes del tracto respiratorio deben manipularse bajo medidas de bioseguridad, ha de recordarse que el bacilo de Koch, la Legionela tienen elevada capacidad patógena.
