ANAEROBIOS: COLORACIÓN DE GRAM COMO DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO EN LA INVESTIGACIÓN DE ESTOS MICROORGANISMOS.

ANAEROBIOS: COLORACIÓN DE GRAM COMO DIAGNÓSTICO PRESUNTIVO EN LA INVESTIGACIÓN DE ESTOS MICROORGANISMOS.

Autor: Lcda Jhonilys R. Navarro M.

Residente 2^do año Especialidad en Bacteriología Clínica

 

Las bacterias anaerobias normalmente forman parte de la flora habitual de la piel, cavidad oral, tracto respiratorio superior, tracto genital femenino e intestinal de todos los seres humanos [1]. En los últimos años, el incremento de variadas y severas infecciones a causa de estos microorganismos, ha ido en ascenso de forma significativa, con frecuencia se han encontrado asociados con la flora comensal aerobia y anaerobia facultativa presente en los humanos, encontrándose que la mayoría de las infecciones que se producen en muchos casos son de origen endógeno [2,3].

La investigación de estas bacterias anaerobias condiciona una metodología microbiológica especial, debido a la variada sensibilidad al oxígeno y potencial redox reducido que presenta una especie u otra. La investigación de estos microorganismos se inicia desde la información de los datos clínicos suministrados que sugieren una presunta infección anaeróbica, bajo una orientación previa y adecuada acerca de la recolección de la muestra ideal, acompañado de un  transporte apto e inmediato de la misma, y un sistema de procesamiento útil que permita la correcta identificación de los mismos.  Éste debe contar con al menos, dos etapas: una dedicada a la búsqueda e identificación preliminar (a nivel de género o “grupo”) de anaerobios, y otra que intente conseguir una identificación más precisa y estudios de sensibilidad a los antibióticos que habitualmente tienen actividad sobre estas bacterias [4].

El interés por la búsqueda de bacterias anaerobias ha hecho necesaria la incorporación de técnicas sencillas y económicas utilizadas de rutina en los laboratorios bacteriológicos, con el fin de ofrecer una ayuda diagnóstica presuntiva en casos infecciosos por estos microorganismos, un ejemplo de esto lo constituye la coloración de Gram [5]. Esta constituye una herramienta muy útil, ya que proporciona información inmediata semicuantitativa acerca de las diferentes morfologías  bacterianas existentes y su afinidad a la coloración, ausencia de leucocitos en procesos anaerobios, entre otros. Esta información es sumamente considerada cuando existe una ausencia de crecimiento bacteriano en el cultivo de las muestras [4].

Como en casi toda la bacteriología, la morfología de los anaerobios se basa en la coloración de Gram. Sin embargo, se plantea un problema adicional por la poca estabilidad de los anaerobios a la coloración, convirtiéndose en Gram inestables o variables, se deben tomar en cuenta dos aspectos importantes en la coloración de Gram para anaerobios: 1) Es preferible efectuar la decoloración solamente con alcohol etílico que la mezcla alcohol-acetona, lo que favorece mayor estabilidad frente a la decoloración y 2) Prolongar el tiempo de contacto con Lugol hasta 1 minuto [6].

La morfología celular sobre las bases de la coloración de Gram, permite sugerir la presencia de un género anaerobio, distinguiendo sus variadas formas:

-       Bacilos pleomórficos Gram negativos que se tiñen débilmente, Bacteroides.

-       Cocobacilos sugestivos de especies pigmentadas,  Prevotella o  Porphyromonas.

-       Bacilo gramnegativo fino y fusiforme y a menudo dispuesto en parejas, unidos por un extremo, Fusobacterium spp. (Fusobacterium periodonticum, y especies microaerófilas de Capnocytophaga muestran estas características). Bacilos muy pleomórficos filamentosos con zonas hinchadas o redondas de tinción irregular, se pueden observar en Fusobacterium mortiferum,  Fusobacterium ulcerans  y, ocasionalmente, en Fusobacterium necrophorum.

-       Cocos gramnegativos pequeños son indicativos de  Veillonella.

Los bacilos grampositivos anaerobios adoptan múltiples formas y pueden aparecer grampositivos o "gramvariables".

-       Bacilo grampositivo grueso, de forma rectangular y sin esporas es sugestivo de  Clostridium perfringens (las esporas de Clostridium se ven raramente en las coloraciones de los exudados)

-       Bacilo grampositivo ramificado es sugestivo de Actinomyces o Propionibacterium [4].

La coloración directa en muestras clínicas relevantes como abscesos, exudados cutáneos fétidos, piel y partes blandas necrotizantes, puede ser de valiosa utilidad, dada la alta especificidad del Gram en estos contextos. Esto también debe considerarse en los líquidos corporales estériles, como ascítico, de diálisis peritoneal, articular, pericárdico, amniótico, pleural, sinovial, intraocular, entre otros, sobre todo cuando existe un fallo en el cultivo de estas muestras [7]. Un ejemplo de la utilidad diagnóstica de la coloración se evidencia en las Vaginosis Bacterianas (VB). Este cuadro clínico se encuentra  asociado a una bacteria anaerobia estricta llamada Mobiluncus, el cual se presenta como un bacilo Gram negativo en forma de coma, su cultivo es extremadamente difícil (requiere hasta un mes para su aislamiento). No obstante, la tinción de Gram en este caso es más importante que el cultivo dado la baja sensibilidad que este posee, y representa el método de diagnóstico presuntivo de tal agente, aún más, es el método propuesto y evaluado en la VB [8,9,10,11].

Para establecer un diagnóstico presuntivo de una infección por anaerobios es importante que el bacteriólogo correlacione el origen de la muestra con la morfología observada en la tinción de Gram. Si no se consigue obtener el aislamiento del anaerobio sospechoso (por algún fallo en los distintos pasos del diagnóstico y/o por  inhibición del microorganismo por un antibiótico residual, aunque no es muy común), la morfología y afinidad tintorial del mismo pudiera sugerir un diagnóstico presuntivo por anaerobios, y  permitiría establecer el inicio de una terapia empírica adecuada ante este proceso infeccioso, mientras que el proceso de aislamiento e identificación finalice.

Referencias Bibliográficas

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[4]  SEIMC. Microbiología Clínica, Cap.16.Bacterias Anaerobias 2004.

[5] Quesada C, Rodríguez E, Gamboa M. Bacterias anaerobias aisladas en muestras clínicas de pacientes de un hospital regional de adultos de Costa Rica. Rev Biomed 2007; 18:89-95.

[6] C. Rivas, M. Mota. Bacterias anaerobias.  TEMAS DE BACTERIOLOGÍA Y VIROLOGÍA MÉDICA. Consultada: http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/BacteriasAnaerobias.pdf

[7]  Garrido R, Pedroche C, López F. Infecciones por anaerobios Unidad de Enfermedades Infecciosas. Hospital Universitario Madrid. Medicine 2006; 9(51): 3319-3328.

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[10] Joesoef M, Hillier S, Josodiwondo S, Linnan M. Reproducibility of a scoring system for Gram stain diagnosis of bacterial vaginosis. J Clin Microbiol 1991; 29: 730-1731.

[11] Cook R, Redondo-López V, Schmitt C, Meriwether C, Sobel J. Clinical, microbiological, and biochemical factors in recurrent bacterial vaginosis. J Clin Microbiol 1992; 30: 870-877. 

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Neumonía bacteriana: Un enfoque para el diagnóstico microbiológico.

Neumonía bacteriana: Un enfoque para el diagnóstico microbiológico.

Lcda Amarilys Desiree Chávez Díaz

Residente de 2do año Bacteriología Clínica-HVC.

Introducción.

            La neumonía es una infección aguda del parénquima pulmonar producida por diferentes agentes, entre ellos virus y bacterias, esta cursa con una serie de signos clínicos que durante la exploración semiológica orientan al médico al diagnóstico presuntivo; esta patología está catalogada como una de las enfermedades infecciosas que más afecta a la población tanto pediátrica como adulta, encontrándose ubicada entre las diez principales causas de muerte en Venezuela [1,2,3]. El diagnóstico etiológico de la neumonía constituye una herramienta clave que aporta información al clínico y es fundamental para la mejoría del paciente ya que permite instaurar una terapia antimicrobiana acorde al microorganismo causal; es por ello que el personal de laboratorio debe conocer los agentes etiológicos de las neumonías de acuerdo a la región y condiciones del paciente, así como los tipos de muestras que se destinan al diagnóstico de esta patología; lo antes descrito resulta importante ya que el procedimiento para la siembra de dichas muestras varía dependiendo de la técnica de recolección, bien sea no invasivas,  invasivas broncoscópicas o invasivas no broncoscópicas; a pesar de que no existe diferencia entre las dos últimas técnicas, es esencial que los procedimientos microbiológicos aporten resultados con cuantificación bacteriana que permitan diferenciar colonización de infección [4].

Clasificación de las neumonías y etiología

            La neumonía se clasifica de acuerdo al ambiente donde se adquiere, y de esto depende la orientación hacia un grupo de agentes etiológicos, a la hora de seleccionar los medios de cultivo para el aislamiento en el laboratorio.    Cuando se trata de un proceso incubado en un ambiente extra-hospitalario se conoce como Neumonía Adquirida en la Comunidad (NAC) o si ocurre en las primeras 72 horas del ingreso a una institución hospitalaria, aquí se incluyen las casas de reposo y centros geriátricos [5,6,7]. Los estudios realizados en Venezuela sobre los agentes etiológicos de la neumonía bacteriana coinciden que  el Streptococcus pneumoniae continúa siendo el patógeno más frecuente en NAC; Mycoplasma pneumoniae y  Chlamydophila pneumoniae pueden ser el agente causal dentro del grupo de los atípicos y pueden estar en conjunto con S. pneumoniae. Así mismo los bacilos Gram negativos tipo Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, como Pseudomonas aeruginosa en casos de pacientes con inmunosupresión, hogares de cuidado, VIH, alteración  anatómicas pulmonares entre otros factores de riesgo; varios autores coinciden en el papel que juega Legionella como agente etiológico de la NAC, a pesar de que en Venezuela la prevalencia es baja, debería considerarse en pacientes que hayan viajado a lugares con alta prevalencia (Estados unidos y Europa) o con factores de riesgo (enfermedad renal, diabetes mellitus, exposición a aguas de spa) [1, 5, 6, 8, 9, 10, 11].

            En contraste con lo anterior, la neumonía que se adquiere después de 48  horas de haber ingresado a una institución asistencial, o que para el momento de ingreso, no estaba en período de incubación, se denomina Neumonía Nosocomial (NN), suele presentarse como complicación en pacientes conectados a ventilación mecánica, esto ocurre debido a la pérdida de la integridad de la mucosa orofaringea lo que afecta la adherencia de bacterias grampositivas y facilita la colonización por gramnegativas [12,13,14].

            En cuanto a los agentes etiológicos de la neumonía nosocomial es importante resaltar que varían  entre los distintos centros hospitalarios y condiciones del paciente, ésta es una de la razones por la que se hace necesario realizar el estudio microbiológico; se recomienda realizar cultivos cuantitativos o semicuantitativos antes de iniciar la terapia con antibióticos, sin embargo la terapia empírica inicial aumenta la probabilidad de pronta recuperación y debe ser cambiada luego de la identificación del microorganismo. Los patógenos comúnmente asociados cuando el inicio es temprano (menos de 5 días de hospitalización) son  H. influenzae, S. pneumoniae y S. aureus meticilino sensible, cuando el comienzo es tardío (más de 5 días de hospitalización) se asocian bacilos Gram negativos Enterobacteriaceae, Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter spp y cocos Gram positivos como Staphylococcus aureus meticilino resistente, aunque también pueden ser de etiología polimicrobiana. Es importante tener en cuenta los factores de riesgo que se asocian con patógenos específicos, como lo es ventilación mecánica con P. aeruginosa, Acinetobacter spp y Staphylococcus aureus, así como casos de aspiración documentada o reciente cirugía abdominal se asocia con anaerobios [1, 15,16, 17, 18, 19,20].

            El diagnóstico microbiológico debe funcionar de manera integrada por lo que no deben olvidarse otros agentes etiológicos que causan neumonías, como los hongos y virus.

Tipos de muestras y procesamiento.

            Las muestras del Tracto Respiratorio Inferior (TRI) pueden obtenerse por procedimientos invasivos o no invasivos. Las recogidas por procedimientos no invasivos incluyen los esputos, los aspirados endotraqueales (pacientes intubados) y las secreciones bronquiales.  El esputo espontaneo es la muestra que más se recibe en el laboratorio, sobre todo para diagnostico de NAC, el microbiólogo debe evaluar la calidad de dicha muestra aplicando, en  la coloración de Gram, los criterios de Murray y Washington (1975) considerando una muestra de calidad la que contiene más de 25 leucocitos polimorfos nucleares y menos de 10 células epiteliales escamosas por campo de 100x (bajo aumento), se deben describir los morfotipos observados y predominantes en campo de 1000x  para darle valor en el posterior cultivo cualitativo, que se realiza de igual manera para las secreciones bronquiales sembrando en placas con asa estéril y reaislando en al menos tres áreas o cuadrantes [13,21].  

            Se debe realizar cultivos cuantitativos en los aspirados endotraqueales (AET), muestras obtenidas por fibrobroncoscopia, como cepillado por catéter telescopado protegido (CTP), que se debe introducir en 1mL de suero salino fisiológico, y  Lavado Broncoalveolar (LBA), y muestras obtenidas por técnicas ciegas. Este cultivo se puede realizar haciendo diluciones seriadas en solución salina fisiológica o sembrando directamente con asa calibrada, previo a esto la muestra debe homogeneizarse en vortex y se debe realizar extendido para coloración de Gram en todos los casos [11,13,15].

            La aplicación de los cultivos cuantitativos al aspirado traqueal, las muestras obtenidas por fibrobroncoscopia y a los métodos ciegos ha rentabilizado significativamente el diagnóstico microbiológico de la neumonía nosocomial y en particular de la Neumonía Asociada a Ventilación (NAV), permitiendo establecer puntos de corte en los recuentos de colonias que diferencian las bacterias contaminantes o colonizantes de las bacterias potencialmente patógenas, presentes en altas concentraciones [12,13,18,19].

            Los medios de cultivo a emplear en general son los mismos tanto para las muestras obtenidas por técnicas invasiva y no invasivas, agar sangre de carnero 5% (o agar sangre de caballo), una placa de agar chocolate y una placa de agar MacConkey o agar EMB. En caso de sospecha de infección por Legionella spp se debe incluir una placa de agar BCYEa,  para diagnóstico de infección por anaerobios, la muestra ideal es el CTP o biopsias, y se debe sembrar en medios de cultivo para anaerobios. Las condiciones de incubación deben ser a una temperatura de 35-37ºC en atmósfera de CO₂ al 5% durante 48 horas como mínimo, se recomienda la incubación hasta las 72 horas. La placa para anaerobios se incubará en atmósfera de anaerobiosis durante el mismo tiempo y temperatura. Las placas para Legionella spp. deben incubarse en la misma atmósfera de CO₂ durante 10 días [7,13,20]

            A la hora de interpretar el cultivo, se debe tener en cuenta los morfotipos que predominan en el Gram, no identificar microorganismos pertenecientes a la microbiota habitual, evaluar microorganismo con crecimiento significativo y predominante en el cultivo y si no se aíslan bacterias consideradas patógenos se debe reportar que sólo hubo desarrollo de microbiota habitual.

            En este orden de ideas, los cultivos cuantitativos deben valorarse considerando los puntos de corte establecidos, y se muestran en la tabla 1 junto con la sensibilidad y especificidad de cada uno.

Tabla 1. Valores de sensibilidad, especificidad y puntos de corte de acuerdo a la técnica de obtención de muestra

Técnica	Punto de corte	Sensibilidad	Especificidad
AET	≥106 ufc/ml	71-82 %	83-89%
CTP	≥103 ufc/ml	78%	100%
LBA	≥104 ufc/ml	22-100%	88%

Fuente: Rev chil infect 2011; 28(2): 130.151.

Otras técnicas para el diagnóstico de neumonía

            En la actualidad se dispone de técnicas rápidas inmunocromatográficas para la detección en orina y líquido pleural de antígenos bacterianos de S. pneumoniae y L. pneumophila, de gran valor para el diagnóstico de la NAC. El hemocultivo se considera un examen fundamental por las implicaciones en el diagnóstico y tratamiento del paciente sobre todo en NAV, a pesar de su baja sensibilidad y especificidad; el recuento de micoorganismos intracelulares en LBA es otra estrategia rápida, tiene puntos de corte variables desde 1%-15%, con una sensibilidad de 37-100% y especificidad 89-100% [22,23].

Conclusión

            El diagnóstico etiológico de neumonía constituye una herramienta clave para el tratamiento apropiado del paciente. Es importante conocer los diferentes tipos de muestras que se reciben en el laboratorio para el diagnóstico de neumonía y su correcto procesamiento, así como los datos de comorbilidad de los pacientes para la interpretación del cultivo.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

1-      SOVETORAX. III Reunión consenso en prevención diagnóstico y tratamiento de las infecciones respiratorias 2008. Disponible: http://www.sovetorax.org/

2-      Ministerio de la Salud de Argentina. Infección respiratoria aguda del adulto, guía para el equipo de salud nro 4, 2009. En:  http://www.msal.gov.ar/. Acceso 15 de Julio 2011

3-      Picazo JJ, Pérez-Cecilia E, Herreras A y Grupo DIRA. Estudio de las infecciones respiratorias extrahospitalarias. Enferm Infecc Microbiol Clin 2003; 21(8):410-6.

4-      Bouza M, Torres M. y Burillob A. Aportación del laboratorio de microbiología al diagnóstico de la neumonía asociada a la ventilación mecánica. Enferm Infecc Microbiol Clin 2005; 23(3), 2-9.

5-      Gonzalo Valdivia C.  Epidemiología de la neumonía del adulto adquirida en la comunidad. Rev Chil Enf Respir 2005; 21: 73-80.

6-      Altamiranda C, Levy G, López Strauss A, Pérez MM, Rojas C y Tálamo C. Neumonía Adquirida en la comunidad. En: http://www.sovetorax.org/consensos.html. Acceso20 de noviembre 2011.

7-      Sociedad Española de quimioterapia. Consenso tratamiento antibiótico empírico inicial de la neumonía adquirida en la comunidad en el paciente adulto inmunocompetente. Rev Esp Quimioterap 2003; 16(4):457-466.

8-      Picciuto A, Vicent E, Valenzuela P, Pérez J, Lugli M y Linares F. Actualización de las guías para el tratamiento de la neumonía adquirida en la comunidad (NAC) en el adulto. Caracas: Sociedad Venezolana de Infectología; 2010.

9-      Silva, M. et al. Consenso Neumonía Adquirida en la Comunidad 2003.

10-  Barberán J, et al. Evidencia cientifica y concepción global del tratamiento empírico de la infección respiratoria baja en la comunidad. Rev Esp Quimioterap 2004; 17(4):377-324.

11-  Dorca Sargatal J. Diagnóstico y tratamiento de la neumonía adquirida en la comunidad. En: www.separ.es/doc/publicaciones/normativa/normativa_012.pdf Acceso 5 de diciembre 2011.

12-  Isturiz R et al. Neumonía Nosocomial Consenso de Expertos. 2000.

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14-  Torres Martí A. Diagnóstico y Tratamiento de Neumonía nosocomial. En: www.separ.es/doc/publicaciones/normativa/rec09.pdf.Acceso 5 de diciembre 2011.

15-  García Satué JL y Aspa Marco J. Neumonías. Volumen IX. Madrid: Ergon; 2005.

16-  Figueredo A y col. Consenso Venezolano de Neumonía Nosocomial. Puerto Ordaz: Sociedad Venezolana de Infectología; 2006.

17-  Sharp SE, Robinson A, Saubolle M, Santa Cruz M, Carroll K y Baselski V. Lower Respiratory Tract Infections. Washington, D.C. : American Society for Microbiology; 2004.

18-  Sicilia-Urbán P, Sanz-Rojas y R. Serrano-Heranz. Protocolo de diagnostico de neumonía adquirida en la comunidad y neumonía nosocomial Medicine. 2010;10(50):3389-93.

19-  Lisboaa T y Rello J. Neumonia nosocomial por gram positivos. Enferm Infecc Microbiol Clin. 2008;26 Supl 2:53-60.

20-  Macedo M y Mateos S. Infecciones Respiratorias. En: www.higiene.edu.uy/cefa/2008/Infeccionesrespiratorias.pdf. Acceso: 25 de noviembre 2011.

21-  Forbes B, Sahm Domínguez J, Galí N, Blanco S, Pedroso P, Prat C, Andreu F, et al. Detectionof Streptococcus pneumoniae antigen by a rapid immunochromatografic assain urine samples. Chest. 2001;119:243-9.

22-  Helbig JH, Uldum SA, Luck PC, Harrison TG. Detection of Legionella pneumophila  antigen in urine samples by the Binax now immunochromatographicassay and comparison with both Binax Legionella Urinary Enzyme Immunoassay (EIA) and Biotest Legionella Urin Antigen EIA. J Med Microbiol 2001;50:509-16.

23-   Labarca J. Neumonía asociada a Ventilación mecánica. Rev. chil. Infectol 2001;-(18)2.

IMPORTANCIA DE LAS BACTERIAS ANAEROBIAS EN ENDOCARDITIS

Autor: Eslava Irosoky

Las bacterias anaerobias juegan un papel importante en la patogenicidad de una amplia variedad de infecciones mixtas, donde se ven involucrados gérmenes aerobios y anaerobios, tales como neumonía por aspiración, infecciones intraabdominales, infecciones ginecológicas, de piel y partes blandas. Sin embargo, hay otros procesos en los que raramente se hallan implicadas estas bacterias y que debemos también considerar, como meningitis, endocarditis y artritis séptica (1). Estos microorganismos forman parte de la flora normal en diversas partes del cuerpo humano, siendo especialmente abundantes en el tracto gastrointestinal, la cavidad oral, piel y mucosas, convirtiéndose en patógenos oportunistas cuando se ven favorecidos por factores predisponentes, tales como la disrupción de mucosas, lo cual les permite acceder a tejidos normalmente estériles, y el uso de antibióticos con bajo o ningún espectro de acción sobre anaerobios, lo cual les facilita la proliferación por eliminación de la flora asociada (4,5). Estos factores, sumados a otros como la baja tensión de oxígeno, hacen que la mayoría de las infecciones anaeróbicas se originen a partir de miembros de la flora endógena del organismo.
Los microorganismos anaerobios constituyen un grupo importante de patógenos bacterianos implicados en la etiología de procesos infecciosos muy diversos. Las especies del genero Clostridium ocasionan en el hombre cuadros especıficos asociados a la producción de toxinas, como el tétanos, el botulismo, la gangrena gaseosa, entre otros; mientras que el resto de las bacterias anaerobias y a veces también algunas especies de Clostridium, causan cuadros inespecíficos. Así mismo las bacterias anaerobias son una causa infrecuente pero importante de endocarditis (5). Entre las fuentes de infección descritas como causantes de endocarditis por bacilos gramnegativos anaerobios se incluyen enfermedad maligna del tracto gastrointestinal, absceso hepático y rotura de apéndice. La endocarditis sobre válvula protésica por Propionibacterium acnes suele ser de origen quirúrgico o por bacteriemias secundarias tras manipulación de piel o mucosas, otro cuadro infeccioso que también aparece raramente descrito en la literatura es la artritis séptica ocasionada por bacterias anaerobias, como Clostridium perfringens, Clostridium difficile, B. fragilis y especies de Veillonella.
Entre los factores predisponentes, signos y síntomas de la endocarditis causada por bacterias anaerobias son similares a las observadas en la endocarditis con bacterias anaerobias facultativas con las siguientes excepciones: el tracto gastrointestinal es la fuente más común de endocarditis B. fragilis , la cabeza y el cuello son para Fusobacterium y Bacteroides spp. y el tracto genitourinario fueron la fuente más común para Peptostreptococos. Las complicaciones con endocarditis anaeróbica incluyen la destrucción valvular, aneurismas micóticos múltiples, absceso del anillo aórtico, aortitis, shock cardiogénico, arritmias y shock séptico. Se sabe que la Endocarditis causada por las bacterias anaerobias son extremadamente raras, pero muchas veces son las únicas causantes de dicha patología. Su frecuencia esta entorno al 2%, variando la incidencia comunicada en la literatura entre el 1% y el 16% del total de endocarditis. (3)
La tasa de mortalidad para los pacientes con endocarditis anaerobios es 21-43%. El tratamiento de la endocarditis por bacterias anaerobias incluye el uso de la terapia de antibiótico efectivo contra estos organismos. Las infecciones por anaerobios son en su mayorıa de origen endógeno, suelen ser polimicrobianas y mixtas, y se asocian a tasas significativas de morbilidad y mortalidad. El impacto de una terapia empırica adecuada en la evolución de las infecciones por anaerobios, como las bacteriemias, ha sido puesto de manifiesto por diversos autores. Por otra parte, las resistencias de las bacterias anaerobias a los antimicrobianos se han incrementado a lo largo de los últimos años y, además, han aparecido nuevas resistencias a antibióticos considerados como universalmente activos frente a este tipo de bacterias. Es importante, por lo tanto, conocer los patrones de sensibilidad de estas bacterias para evitar el uso inapropiado de los antibióticos administrados empíricamente. (1)
Dado que las bacterias anaerobias son oportunistas, es difícil muchas veces demostrar su patogenicidad, ya que forman parte de la flora habitual del cuerpo humano y se aíslan generalmente junto con otras bacterias. Los avances en los medios diagnósticos conseguidos en los últimos años, especialmente de las técnicas microbiológicas y la utilización de los métodos fenotípicos clásicos nos permite, en muchas ocasiones, llegar a una correcta identificación bacteriana a nivel de especie. Los métodos moleculares desarrollados a lo largo de la última década nos han proporcionado un mejor conocimiento de la composición bacteriana y como consecuencia, la posibilidad de realizar una identificación correcta a nivel de especie de determinadas bacterias anaerobias, así como de caracterizar nuevos géneros y especies implicadas en la patología infecciosa humana.



Bibliografía:
1.- SEIMC. Microbiología Clínica, Cap.16.Bacterias Anaerobias 2004.
2.- Maxit M de Wouters L, Endocarditis Infecciosa.¿Hay que cambiar el modelo de la enfermedad? Rev. Hospital Privado de Comunidad 2000:3(2):150.1
3.- Turino A. Guevara E. Las formas actuales de la endocarditis infecciosa.
Ed. Panamericana 2000:5:47.
4.- Garcia Rodríguez, Jose A, Compendio de Microbiologia Medica, 1999.
5.- Betriu C, Picazo JJ. El papel de los anaerobios en patología infecciosa. 2010.

INFORMACION CONCURSO INGRESO ENERO 2011

LA DIRECCION DEL POSTGRADO Y LA COMSION DE CONCURSO DE LA RESIDENCIA ASISTENCIAL EN BACTERIOLOGIA CLINICA INFORMA A LOS CONCURSANTES:
UNA VEZ EVALUADO Y EXAMIDOS LOS REQUISITOS Y CADA UNO DE LOS ITEMS PARA EL INGRESO A LA RESIDENCIA ASISTENCIAL EN BACTERIOLOGIA CLINICA, SE OBTUVIERON LOS SIGUIENTES RESULTADOS:

1. JHONILYS NAVARRO: 70,03
2. FRANKLIN ARGUELLO:66,98
3. AMARILYS CHAVEZ:64,90
4. JHOEL PERDOMO:62,85
5. HEYDY TORRA: 59,94
6. REBOLLEDO ANA:54,48.

NOTA DE INTERES:

• LOS CUATROS (4) PRIMEROS LICENCIADOS EN PUNTAJES QUEDAN SELECCIONADOS PARA INGRESAR A LA RESIDENCIA ASISTENCIAL EN BACTERIOLOGIA CLINICA EN ENERO DEL 2011.
• LA EVALUACION FUE DEL UNO (1) AL CIEN (100)
• LOS SELECCIONADOS DEBERAN IR PERSONALMENTE AL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA DEL HOSPITAL VARGAS EN EL TRANSCURSO DE ESTA SEMANA DEL 25/10/2010 AL 29/10/2010.

DIRECCION DE POSTGRADO EN BACTRIOLOGIA CLINICA

APARATO RESPIRATORIO (II) Continuación...

Autor: Lcda. en Bioanálisis María G. Pérez
Revisado por: Lcdo. en Bioanálisis Oliver Balza

Transporte y conservación de muestras del tracto respiratorio inferior.

Las muestras respiratorias deben trasladarse al laboratorio en contenedores estériles, perfectamente cerrados y en un plazo máximo de 2 horas desde su recolección. Los esputos, lavados broncoalveolar, aspirados traqueales se recogen en un frasco de boca ancha con cierre hermético, preferiblemente de rosca, sin medio de transporte. De no llevarse al laboratorio en el plazo de tiempo indicado, guardar en nevera máximo 24 horas. Para las muestras obtenidas por catéter telescopado o biopsia pulmonar se utilizarán tubos estériles con 1 ml de suero fisiológico. Los productos de aspiración se depositan en un tubo estéril con tapón de rosca. Las secreciones recogidas por cepillado se transportan, en tubos con tapón de rosca, diluidas en 1 ml de solución salina.

Manejo de la muestra en la recepción, en el laboratorio de microbiología.

Se deben comprobar los siguientes requisitos:

a) La correcta identificación de la muestra en los recipientes y medios de transporte, así como en los libros de control del laboratorio.
b) Valoración de la cantidad adecuada de la muestra para el estudio solicitado.
c) Comprobación de que el tiempo, condiciones de transporte y conservación son adecuadas.
d) Cultivos y determinaciones solicitadas.

Cada laboratorio debe elaborar y distribuir los criterios de aceptación y rechazo de las muestras. Las muestras que incumplan los requisitos de calidad establecidos, deben ser rechazadas para su procesamiento y se debe emitir un informe escrito en que se detallen los motivos del rechazo.


Procesamiento de la muestra:

Selección de los medios de cultivo y condiciones de incubación.

Las muestras se deben procesadas según las normas de bioseguridad establecidas ya que los aerosoles pueden producir infecciones respiratorias adquiridas en el laboratorio. Se deberán tener en cuenta las siguientes recomendaciones:

- Procesar todas las muestras lo más rápidamente posible para mantener la viabilidad de los patógenos y evitar al paciente repetir los procedimientos de la toma de la muestra.
- Seleccionar la porción más purulenta o más sanguinolenta de la muestra.
- Preparar extensiones de la muestra sobre varios portaobjetos para las tinciones (Gram, Ziehl Neelsen, etc).
- Utilizar hisopos (parte sin algodón, segun sea el caso), pipeta o asa estériles, para inocular las muestras en los medios de cultivo.

Es necesario hacer hincapié en cuanto a la observación de la coloración de Gram de las muestras a procesar; ya que esta proporcionara datos muy importantes para el estudio e interpretación del cultivo; uno de ellos es la calidad de la muestra, es decir si es representativa o no, el parámetro para evaluarla es por medio de los criterios que se describen a continuacion. La ausencia de leucocitos y la presencia de células de planas podria sugerir que no se ha recogido material del foco infeccioso, y la muestra está contaminada o formada por saliva por lo que su evaluación quedaría a criterio.

A continuación se presentan los criterios de reportes para frotis coloreados con la tinción de Gram.

Reporte de la coloración de Gram.

Cantidad relativa de microorganismos Microorganismos observados por campo de inmersión (100x)

0-1 muy escasos

2-5 escasos

6-10 moderado

mayor a 10 abundante.

Blastoconidias observadas por campo de (40x)

0-5 Muy escaso
6-10 Escasos
11-20 Moderados

mayor a 21 Abundante

Nota: Es importante informar y describir claramente todo lo que se observe, presencia y cantidad relativa de células epiteliales, células polimorfonucleares y estructuras fúngicas (se evalúan con objetivo de 40X). En cuanto a los microorganismos bacterianos y fúngicos señalar su morfología, cantidad y disposición. El intervalo de reporte de los elementos cuantificables, no debe exceder de dos células de diferencia por campo observado.

Para la visualización de las micobacterias en las muestras de esputos se utiliza la tinción de Ziehl Neelsen, el hallazgo de bacilos acido resistentes (BAR), en extensiones teñidas y examinadas al microscopio es la primera evidencia de la presencia de micobacterias en una muestra clínica. La característica de acido- resistencia se la debe al alto contenido lípidico de la pared micobacteriana; es el procedimiento más fácil y rápido que se puede efectuar y aporta al clínico una confirmación valiosa que, en condiciones de la salud del paciente y control epidemiologico, sirve para iniciar el tratamiento y confirmar el caso. El microorganismo acido- resistente implicado con frecuencia en infecciones del tracto respiratorio inferior es el Mycobacterium tuberculosis.


A continuación se describirá como se debe reportar el resultado de la coloración de Ziehl Neelsen:

Reporte de coloración Ziehl Neelsen :

Resultado - Microorganismo observado (100x)

Negativo (-) No se observa BAR en 100 campos microscópicos observados.

Positivo (+) < align="justify">Positivo (++) Uno a 10 BAR en 50 campos microscópicos observados

Positivo (+++) Más de 10 BAR en 20 campos microscópicos observados

El reporte se realiza en forma de cruces, según los criterios expresados en la tabla anterior. En caso de encontrarse de 1- 4 BAR en 100 campos microscópicos observados en objetivo de inmersión debe ampliarse la lectura a otros 100 campos utilizando una nueva línea de observación, en la misma preparación, e informar el resultado.

Cultivo:

Los medios a utilizar para cultivos bacterianos son medios enriquecidos, selectivos y diferenciales, dependiendo de la sospecha etiológica. Su elección puede variar dependiendo de la experiencia y preferencias de cada laboratorio. Excepto en algunas investigaciones muy específicas como en el caso de la tuberculosis, el medio solido que comúnmente se utiliza es el Lowenstein Jensen y medios para el aislamiento de Legionella como es el Agar de Carbón Tamponado y Extracto de Levadura (BCYE); y en el caso de Nocardia se utiliza el Martin Lewis entre otros.

Para concluir, es importante resaltar que para el procesamiento de muestras provenientes del tracto respiratorio deben manipularse bajo medidas de bioseguridad, ha de recordarse que el bacilo de Koch, la Legionela tienen elevada capacidad patógena.

INVITACION

SE INVITA A LA COMUNIDAD HOSPITALARIA DEL HOSPITAL VARGAS DE CARACAS, EXALUNNOS, ALUNNOS Y ASPIRANTES AL ACTO DE INSTALACION OFICIAL DE LA RESIDENCIA ASISTENCIAL EN BACTERIOLOGIA CLINICA.
LUGAR. AUDITORIO "A" DEL HOSPITAL VARGAS DE CARACAS.
FECHA: 24 D3 S3PTIEMBRE DEL 2004.
HORA: 9 AM.